Western blotting med serum: Utmaningar och optimeringsstrategier

Att använda serum för Western blot är möjligt men utmanande på grund av:

• Höga mängder proteiner (albumin, IgG) maskerar låga-mängd mål.
• Proteaser, glykoproteiner, lipider orsakar bakgrund, smuts.
• Batchvariabilitet.

Optimeringsstrategier

1. Avlägsna höga-mängd proteiner – Kommersiella kolonner (albumin/IgG-avlägsnande).
2. Centrifugera och filtrera – Ta bort partiklar, lipider.
3. Fördunna optimalt – Balansera signal mot bakgrund.
4. Blockering – 5% BSA eller fettfri mjölk; längre inkubation.
5. Antikroppstitrering – Optimera primära/sekundära koncentrationer.
6. Längre tvättar, strikta buffrar – Minska icke-specifik bindning.
7. Positiva/negativa kontroller – Renat protein, serum från knockout-modell.

När serum föredras

• Detektera autoantikroppar (patientserum som primär antikropp).
• Studera protein-protein-interaktioner i naturligt sammanhang.
• Biomarkerupptäckt när vävnad ej tillgänglig.

För de flesta applikationer är renat protein eller celllysat överlägsen. Använd serum endast när nödvändigt, med rigorös optimering.