Identifiering av mikroorganismer spelar en avgörande roll vid behandling av sjukdomar. Mikroskopisk undersökning av ett färgat utstryk är vanligtvis det första steget för att upptäcka och identifiera sjukdomsframkallande bakterier. Även om metoden inte ger någon definitiv identifiering, ger den viktiga ledtrådar om organismens storlek, form och strukturella sammansättning. Färgningar är antingen direkta eller indirekta, och en direkt färgning kan i sin tur vara antingen enkel eller differentiell. Trots sina begränsningar har direktfärgning många fördelar.
Det första steget i direkta bakteriefärgningsprocedurer är beredningen av ett utstryk. Cellerna från en kultur eller ett prov sprids i en tunn hinna över ett glasobjektglas, torkas och fixeras sedan med värme eller ett kemiskt fixeringsmedel. Fixeringen gör att bakterierna fastnar på glaset och förhindrar att de sköljs bort under färgningsproceduren. Utstryken ska vara tillräckligt tunna för att enskilda celler ska kunna observeras och tillräckligt väl fixerade för att tåla upprepade sköljningar under färgningsprocessen.
På grund av sitt höga vatteninnehåll är mikrober nästan helt färglösa. Färgning förstärker dem och avslöjar deras olika egenskaper. Färgämnen är i allmänhet salter som består av laddade partiklar, så kallade joner. När de blandas med vatten sönderdelas saltet i positivt laddade katjoner och negativt laddade anjoner. Färgämnen är salter där antingen katjonerna eller anjonerna är färgade. Beroende på vilken typ av jon som bär färgen är vanliga mikrobiologiska färgämnen antingen basiska eller sura. Basiska färgämnen innehåller färgade katjoner och färglösa anjoner – exempel är metylenblått, basisk fuksin och kristallviolett. Sura färgämnen har istället färgade anjoner och färglösa katjoner; exempel är eosin, Kongorött och nigrosin.
Bakterier har en lätt negativ nettoladdning. De attraherar därför och binder positivt laddade basiska färgämnen. Eftersom bakterierna själva behåller färgämnet räknas processen som en direkt färgningsmetod. En direkt färgning kan vara antingen enkel eller differentiell. Enkel färgning använder ett enda färgämne för att visa bakteriernas storlek, form och gruppering. En differentiell färgning, som Gramfärgning, använder två olika färgade basiska färgämnen för att skilja mellan olika bakterietyper utöver deras fysiska egenskaper. Indirekta, eller negativa, färgningstekniker använder i stället sura färgämnen. Bakterierna stöter då bort färgämnet och framträder som färglösa mot en färgad bakgrund.
Direktfärgning av bakterieceller är den mest använda tekniken för att visualisera bakterier. Metoden är billig, enkel och relativt snabb. Tekniken ger vårdpersonal resultat redan samma dag – en potentiellt livräddande fördel vid diagnos och behandling av vissa infektioner, exempelvis bakteriell meningit. Direktfärgade utstryk är dessutom permanenta preparat som vid behov kan undersökas igen senare. Eftersom direktfärgningen dödar bakterierna minskar även risken för smitta vid hantering av utstryket.
Hälsa och Sjukdom © https://www.sjukdom.online