Tris-tricin-protokoll: Buffertar för elektrofores

Tris-tricin är ett vitt kristallint pulver som används på molekylärbiologiska laboratorier som buffertlösning. Detta organiska ämne är lösligt i vatten, har en låg surhetsgrad och används i vetenskapliga procedurer, exempelvis gelelektrofores, för att buffra eller balansera pH-värdet i analyserade lösningar. Vanliga tris-tricin-protokoll omfattar SDS-PAGE i en tris-tricinbuffert, framställning av tris-tricingel för elektrofores samt separation av lågmolekylära proteiner.

SDS-PAGE i en tris-tricinbuffert

Polyakrylamidgelelektrofores med detergenten natriumdodecylsulfat (SDS) är en mycket använd teknik för separation av proteiner i liten skala, förklarar G. Brent Irvine, forskare vid Queen's University Belfast, i boken "Neuropeptide Protocols". Tekniker löser upp akrylamid i vatten och håller lösningen vid 39,2 grader Fahrenheit (cirka 4 grader Celsius). Därefter tillsätts tris-tricin, saltsyra, merkaptietanol och SDS för att bilda gelen. Gelen kan sedan placeras i elektroforesapparaten, som är specialutformad för att separera proteiner efter storlek.

Framställning av tris-tricingel

Detta protokoll beskriver beredningen av tris-tricingel för användning i allmänna elektroforesexperiment, enligt University of Washington. Tekniker blandar akrylamidlösning, tris-tricin, klor, SDS och dubbeldestillerat vatten. Därefter tillsätts glycerol och gasen som bildas i lösningen avlägsnas under vakuum i upp till 15 minuter. Ammoniumpersulfat och tetrametyletylendiamin (TEMED) tillsätts därefter, och lösningen svirlas försiktigt för att blanda. Till slut hälls vattenmättad isobutylalkohol över gelen för att få en jämn yta.

Separation av lågmolekylära proteiner

Tris-tricin är en viktig komponent vid separation av lågmolekylära proteiner, skriver Ian M. Rosenberg i boken "Protein Analysis and Purification: Benchtop Techniques". För att bereda elektroforeslösningen med tris-tricin tillsätter tekniker TEMED, färgämnet coomassieblått, gelningsämnena akrylamid och bisakrylamid, saltsyra, glycerol samt SDS. Gelbildningsprocessen är fullbordad inom en timme. Proteinproverna inkuberas vid 104 grader Fahrenheit (cirka 40 grader Celsius) i 30 minuter innan elektroforesanalysen genomförs.