Separering av plasma – blodets acellulära vätskekomponent – från cellulära element som röda blodkroppar, vita blodkroppar och trombocyter är ett grundläggande steg inom klinisk kemi, koagulationstestning och biobankering. Två huvudsakliga fysikaliska metoder dominerar denna process: centriffugation och filtration.
1. Centrifugation: Referensstandarden
Princip
Centrifugation utnyttjar sedimentering under centrifugalkraft (uttryckt som relativ centrifugalkraft, RCF, eller g-kraft). Enligt Stokes lag migrerar tätare partiklar utåt snabbare och bildar distinkta lager baserat på densitet.
Standardprotokoll
- Saml in helblod i ett lämpligt antitrombostub (citrat för koagulationsstudier, EDTA eller heparin för klinisk kemi).
- Balansera rören noggrant i rotorn.
- Centrifugera vid typiska inställningar: 1 500–3 000 ×g i 10–15 minuter vid 20–25 °C. Högre g-krafter eller längre tider ger trombocytfattigt plasma.
- Tre lager uppstår: röda blodkroppar (botten), ett tunt buffy coat (vita celler och trombocyter) och plasma (topp, ~55 % av volymen).
- Aspirera plasma med en pipett, var noga med att undvika buffy coat.
Kritiska variabler
- RCF, inte RPM: RCF = 1,118 × 10⁻⁵ × r (cm) × RPM². Standardisera protokoll efter RCF.
- Temperatur: 20–25 °C för rutinarbete; 4 °C för labila analyser (t.ex. laktat, ammoniak).
- Tid: Otillräcklig centriffugation lämnar trombocytkontaminering, vilket orsakar pseudohyperkalemi och falskt lägre trombocytantal.
- Dubbelcentrifugering är avgörande för trombocytfritt plasma, särskilt för koagulationsfaktoranalyser.
2. Filtration: Plasma-separationstub och membranenheter
Princip
Filtration bygger på storleksexklusion: ett poröst membran (porstorlek ~0,2–0,5 µm) låter plasma passera medan cellulära komponenter hålls tillbaka.
Typer
- Integrerade rör (t.ex. BD PST™, Litiumheparin PST): Kombinerar en gelbarriär med ett polyesterfilter. Under centriffugation bildar gelet en barriär och filtret separerar plasma, vilket eliminerar manuell pipettering.
- Fristående filter (t.ex. Pall, Whatman): Fungerar genom gravitation eller vakuum. Användbara för små volymer, point-of-care-testning eller när en centrifug saknas.
Fördelar
- Snabbare arbetsflöde utan manuellt separationssteg.
- Minskat ris för hemolys eftersom pipettering undviks.
- Lutet system ökar biosäkerheten.
Begränsningar
- Proteinadsorption till membranet kan sänka uppmätta koncentrationer av albumin, immunoglobuliner och andra proteiner.
- Trombocytaktivering och frigivning vid filtration kan förändra koagulationsfaktorer, serotonin och tromboxannivåer.
- Olämpligt för trombocytfunktionstester, vissa koagulationsanalyser och situationer som kräver absolut proteinprecision.
- Volymbegränsat (typiskt 1–5 ml).
Jämförelse och urvalsguide
| Parameter | Centrifugation | Filtration (PST) |
|---|
| Plasmarenhet | Hög (operatörsberoende) | Konstant, men med proteinförlust |
| Trombocytkontaminering | Kontrollerbar via dubbelcentrifugering | Låg (filtret håller tillbaka trombocyter) |
| Analyts lämpighet | Alla tester | Rutinkemi; undvik koagulation, protein och trombocytanalyser |
| Genomströmning | Hög (rotorkapacitet) | Per rör |
| Utrustning | Centrifug krävs | Centrifug (för PST) eller vakuum/gravitation |
| Kostnad per prov | Lägre | Högre (specialrör) |
Kvalitetsessentials
- Fyll rören till angiven volym; förhållandet antikogulant-till-blod är kritiskt.
- Blanda försiktigt genom att vända 8–10 gånger omedelbart efter insamling.
- Processa inom riktlinjers tidsramar (t.ex. citatrör <4 timmar; EDTA-rör <24 timmar vid rumstemperatur).
- Märk tydligt: plasma (antikoagulerat) vs. serum (koagulerat, inget antikogulant).
Centrifugation förblir referensmetoden för högst analytisk noggrannhet. Filtrationstub erbjuder bekvämlighet för högvolymig rutin-kemi – validera mot centrifugering för varje analys innan införande.
