Kryopreparerade perifera blodmononukleära celler (PBMC) är en ofta använd källa till prover inom forskning som rör immunterapier och vaccinsvar. Cellpopulationen består bland annat av lymfocyter (T-celler, B-celler och NK-celler) samt monocytter, vilket gör den värdefull för studier av immunförsvaret. Medan vissa protokoll endast omfattar isolerings- och frysetapperna i processen, inkluderar andra även procedurer för upptining.
En kommersiell separationslösning tillsätts i varje 50 ml-centrifugrör, som därefter centrifugeras i trettio sekunder. Locken på blodprovsrören sprayas med alkohol innan de öppnas, varefter antikoagulantbehandlat helblod överförs med pipett till centrifugrören. Plasmaskiktet från blodet avlägsnas därefter med en pipett.
Cellerna från föregående steg centrifugeras tre gånger med buffrad saltlösning. Efter en cellräkning centrifugeras proven på nytt och suspenderas i frysningsmedium, som vanligen innehåller dimetylsulfoxid (DMSO) för att skydda cellerna under frysprocessen. Proverna i frysningsmedium fördelas sedan i kryorör i mängder om en milliliter. Rörena förvaras över natten i en frys vid -70 °C och flyttas nästa dag till långtidsförvaring i flytande kväve.
Kryorören överförs från flytande kväve till ett vattenbad vid 37 °C, där provet får tina i en till två minuter. Varmt transportmedium tillsätts därefter till varje rörl. Den utspädda cellsuspensionen centrifugeras i sju minuter, varefter antal celler och cellviabilitet kontrolleras. Om cellerna behöver koncentreras centrifugeras proven ytterligare sju minuter. Provets späds slutligen till arbetslösning och får vila i tolv till arton timmar innan undersökningen enligt det specificerade protokollet påbörjas.
Hälsa och Sjukdom © https://www.sjukdom.online